瓊脂糖凝膠的配制
⑴瓊脂糖凝膠的制備:稱取0.3g瓊脂糖,置于三角瓶中,加入30ml TBE或TAE緩液,置于三角瓶中,加入30ml TBE或TAE緩液,置于三角瓶中,加入30ml TBE或TAE緩液,將該三角瓶置于微波爐加熱至瓊脂糖溶解。將冷卻至65℃左右的瓊脂糖凝膠液,加入溴化乙錠,充分混勻。
⑵膠板的制備:
①取有機玻璃內槽,洗凈、晾干;
②將有機玻璃內槽置于一水平位置模具上,安好擋板,放好梳子。吸取少量瓊脂糖溶液封固膠膜邊緣,任其凝固,在距離底板0.5~1.0mm的位置上放置梳子,以便加入瓊脂糖后可以形成完好的加樣孔。如果梳子距離玻璃板再近,則拔出梳子時孔底將有破裂的危險,破裂后將使樣品在凝膠與玻璃板之間滲漏。
③將剩余的溫熱瓊脂糖溶液倒入膠膜中,使膠液緩慢地展開,直到在整個有機玻璃板表面形成均勻的膠層。凝膠的厚度在3~5mm之間,檢查一下梳子的齒下或齒間是否有氣泡。
④室溫下靜置30min左右,待凝固完全后,輕輕拔出梳子,在膠板上即形成相互隔開的上樣孔。制好膠后將鋪膠的有機玻璃內槽放在含有0.5~1×TAE(Tris-乙酸) 或TBE(Tris-硼酸)工作液的電泳槽中使用,沒過膠面1mm以上。
(注:溴化乙錠是一種強烈的誘變劑并有中度毒性。使用含有該染料的溶液時必須戴手套。使用完后應該進行凈化處理。通常用水配制成10mg/ml的貯存液在室溫下避光儲存,使用終濃度為0.5μg/ml。)