化學(xué)性質(zhì)
中文名稱:溶菌酶
中文同義詞:溶菌酶凍干粉;雞蛋白;溶菌酶原料藥生產(chǎn)廠家;溶菌酶,來源于雞蛋,≥20,000單位/毫克;溶菌酶來源于雞蛋白LYSOZYMEFROMCHICKENEGGWHITE;溶菌酶原料藥;溶菌酶原料藥廠家現(xiàn)貨;醫(yī)藥級溶菌酶
英文名稱:Lysozyme
英文同義詞:LYSOZYME3xcrystallisedextrapure;LysozymeAgarosefromchickeneggwhite;MucopeptideN-acetylmuramoylhydrolase,Muramidase;LYSOZYMEFROMCHICKENEGGWHITECA.150000U/MGCRYST.;Lysozymefromchickeneggwhite,MucopeptideN-acetylmuramoylhydrolase,Muramidase;Lysozyme[fromchickenegg,50000units/mg];Lysozymes;REDUCEDLYSOZYME,WATERSOLUBLE
CAS號:12650-88-3
分子式:C125H196N40O36S2
分子量:2899.27014
EINECS號:235-747-3
溶菌酶 性質(zhì)
儲存條件 2-8°C
形態(tài)powder
顏色white
PH值pH(15g/l, 25℃) : 3.0～5.0
性狀
溶菌酶為白色晶體，堿性蛋白質(zhì)，等電點 PH10.5～11.0 。溶菌酶產(chǎn)品活力≥ 2.0 萬 u/mg ，溶于稀鹽水，在丙酮和乙醇作用下生成沉淀，酸性溶液比較穩(wěn)定，加熱至 55 ℃ 也不會受到影響，其水溶液在 62.5 ℃ ， 30 分鐘會完全失活，而 15% 乙醇溶液在 62.5 ℃， 60 分鐘， 20.5% 乙醇溶液在 62.5 ℃， 20分鐘也不失活。可溶解細菌細胞，特別是對細球菌有較強作用，具有抗菌素的各種性質(zhì)，這是因為它對細胞膜壁的糖蛋白質(zhì)（類粘蛋白）的多糖類，具有分解作用，可分解幾丁質(zhì)和乙二醇幾丁質(zhì)，得到碳酸鹽、鹽酸鹽和硝酸鹽結(jié)晶等。
作用機理
溶菌酶對革蘭氏陽性菌、好氣性孢子形成菌、枯草桿菌、耐輻射微球菌均有良好的分解作用,對大腸桿菌、普通變球菌和副溶血性弧菌等革蘭氏陰性菌也有一定程度的溶解作用。溶菌酶具有分解細菌細胞壁中肽聚糖的特殊作用。細菌的細胞壁由胞壁質(zhì)組成,胞壁質(zhì)是由Ｎ-乙酰氨基葡萄糖及Ｎ-乙酰胞壁酸交替組成的多聚物,胞壁酸殘基上可以連接多肽,稱為肽聚糖。多糖以直鏈形式存在,彼此鄰近的多糖鏈之間可以通過肽鏈部分相互連接,從而形成三維結(jié)構(gòu)。酶的活性中心是天門冬氨酸和谷氨酸,溶菌酶通過其肽鍵中第35位的谷氨酸和第52位的天門冬氨酸構(gòu)成的活性部位水解破壞組成微生物細胞壁肽聚糖分子的Ｎ-乙酰胞壁酸(NAM)與Ｎ-乙酰葡萄糖氨(NAG)之間的β-1,4糖苷鍵,使細胞因滲透壓不平衡引起破裂,從而導(dǎo)致菌體細胞壁溶解而起到殺死細菌(尤其是球菌)的目的。
化學(xué)性質(zhì)
白色或微白色凍干粉，溶于水，不溶于乙醚和丙酮，pI為11.0-11.35，最適pH值6.5。穩(wěn)定性：酸性介質(zhì)中可穩(wěn)定存在，堿性介質(zhì)中易失活；96℃， pH值為3條件下，15min后活力保持87%。抑制劑有碘、咪唑和吲哚衍生物、表面活性劑(十二烷基硫酸鈉、醇類和碳鏈不少于12的脂肪酸)。1%水溶液在281.5nm處的吸光系數(shù)為26.4。通過水解細菌細胞壁的肽聚糖來溶菌，酶反應(yīng)： Micrococcus luteus或Micrococcus lysodeikticus菌懸浮液═溶菌并澄清。
儲存方法
建議在陰涼干燥的環(huán)境下避光保存，儲存溫度：零度以下。
貯藏過久或貯藏條件不利，會使酶活不同程度的降低；如溫度濕度過高，則需要在使用時適當(dāng)?shù)脑黾邮褂昧俊?/p>
安全信息
危險品標(biāo)志 B
安全說明 23-24/25-22
WGK Germany 3
RTECS號OL5989850
F 3-10
海關(guān)編碼 35079090
合成方法
目前溶菌酶可以以雞蛋清和蛋殼膜為材料提取制得，常用的方法有親和層析法、離子交換樹脂法、直接結(jié)晶法和聚丙烯酸沉淀法等。
親和層析法
親和層析法是利用蛋白質(zhì)和酶的生物學(xué)特異性，即蛋白質(zhì)或酶與其配體之間所具有的專一性親和力而設(shè)計的色譜技術(shù)。酶一底物復(fù)合物形成之后，在一定的條件下分離復(fù)合物便得到純凈的酶。常常使用的吸附劑為幾丁質(zhì)及其衍生物，如：幾丁質(zhì)粉、羧甲基幾丁質(zhì)、幾丁質(zhì)包埋纖維素、脫氨幾丁質(zhì)粉、N-?；瘹ぞ厶恰⒚摪痹偕鷰锥≠|(zhì)凝膠。
離子交換樹脂法
離子交換法是利用離子交換劑與溶液中的離子之間所生的交換反應(yīng)來進行分離的，分離的效果較好，廣泛用于微量組分的富集。一般流程為：鮮蛋一預(yù)處理一攪拌吸附一上柱洗脫一等電點沉淀一透析一噴霧干燥一成品。 [9]
溶菌酶在等電點以下較廣泛的pH值范圍內(nèi)，分子帶正電荷，可吸附于弱酸性陽離子交換樹脂上，洗脫后鹽析，可得溶菌酶沉淀，再進行精制可得成品。蛋清吸附724樹脂，洗滌緩沖液洗脫，硫酸銨溶液鹽析透析，用NaOH去堿性蛋白，凍干溶菌酶，凍干粉沉淀干燥得到溶菌酶。在5—10℃下，將新鮮蛋清540kg加入到已處理好的80kg 724樹脂中，攪拌吸附6h，在0—5℃靜置過夜。傾出上層蛋清，樹脂離心甩干，用蒸餾水反復(fù)洗去黏附的卵蛋白，然后將樹脂裝入柱內(nèi)，用0.15mol/L、pH=6.5磷酸緩沖溶液約150L洗滌樹脂，再用約600L的10%硫酸銨溶液洗脫，收集洗脫液。洗脫液中加硫酸銨，使最終含硫酸銨量為40%，有白色沉淀生成，冷處放置過夜。虹吸上層清液，沉淀吸濾抽干，再用1倍蒸餾水溶解沉淀呈稀糊狀，然后裝入透析袋，在約5℃的條件下，對蒸餾水透析24h左右，中間換水2—3次。離心去除沉淀，沉淀再用少量水洗一次，洗液與離心液合并。再往透析清液中慢慢加入1mol/L氫氧化鈉溶液，同時不斷攪拌，使pH值上升到8.0—9.0，如有白色沉淀，即離心除去。然后用3mol/L鹽酸調(diào)pH=5.0，冷凍干燥，即得白色片狀溶菌酶。也可將離心液用3mol/L鹽酸調(diào)pH=3.5，在攪拌下緩慢加入5%的固體氯化鈉，在約5℃的溫度下靜置48h，離心，沉淀用0℃丙酮洗滌，干燥，即得溶菌酶。
食鹽直接結(jié)晶法
在蛋清中加入一定量的碘化物或碳酸鹽等鹽類，并調(diào)pH值至9.5—10.0，溶菌酶會以結(jié)晶形式慢慢析出，而大多數(shù)蛋白質(zhì)仍然在溶液。在超濾濃縮脫鹽后，為獲得較純產(chǎn)品，采用結(jié)晶純化酶液經(jīng)超濾處理后，用NaOH調(diào)整pH 9.5，離心去除。上清液在緩緩攪拌下，加NaCl至5%，靜置一周，得粗結(jié)晶。結(jié)晶溶于pH 4.6醋酸水中，分去不溶物后，進行重結(jié)晶，結(jié)晶的最終得率為60%左右。即每公斤蛋清中可得重結(jié)晶品近1.3 g，活力測定為8000U/mg。
聚丙烯酸沉淀法
聚丙烯酸沉淀法為將提取過濾后含酶洗脫液，首先經(jīng)過吸附步驟，即將過濾后的澄清溶液用20%的NaOH溶液調(diào)pH至6.0，在調(diào)pH值的過程中不停的攪拌。有少量的乳白色沉淀析出，然后加入15%聚丙烯酸，立即有白色沉淀析出，加至pH值為3.0為止，靜置17個小時進行靜析，得到粘附于底部的乳白色膠狀物。第二步解離，將前步得到的溶菌酶聚丙烯酸凝聚物。加入少量蒸餾水并用0.5 mol/L的碳酸鈉，將其溶解，轉(zhuǎn)移后，將pH值調(diào)到9.5。加入5%CaCl2溶液將溶菌酶聚丙烯酸解離，至無沉淀析出，然后過濾，得到澄清溶液。第三步鹽析，將所得澄清溶液加入5%的NaCI溶液攪拌均勻。放入冰箱調(diào)溫度為0℃。待有晶體析出后，用無水乙醇洗滌數(shù)次，置恒溫培養(yǎng)箱中40℃條件下干燥稱重。
上下游產(chǎn)品信息
表征圖譜
相關(guān)文獻
用途
醫(yī)學(xué)領(lǐng)域
可作為一種具有殺菌作用的天然抗感染物質(zhì)。有抗菌、抗病毒、止血、消腫止痛及加快組織恢復(fù)功能等作用。溶菌酶含片用于急慢性咽炎、口腔潰瘍等。
副作用
偶有較輕的過敏反應(yīng)、皮疹等。
食品領(lǐng)域
它對革蘭氏陽性菌、喜氧性孢子形成菌、枯草桿菌、地衣型芽孢桿菌等都有抗菌作用，而對沒有細胞壁的人體細胞不會產(chǎn)生不利影響。因此，適合于各種食品的防腐。 另外，該酶還能殺死腸道腐敗球菌，增加腸道抗感染力，同時還能促進嬰兒腸道雙歧乳酸桿菌增殖，促進乳酪蛋白凝乳利于消化，所以又是嬰兒食品、飲料的良好添加劑。
生物工程領(lǐng)域
溶菌酶專性水解細菌細胞壁的特點，有助于了解細菌細胞壁的構(gòu)造：將細胞壁分解后制備成的原生質(zhì)體，可用于微生物分類以及微生物育種等學(xué)術(shù)研究。近年來，溶菌酶已成為細胞工程和基因工程必不可少的工具酶，用來提取和制造酶、核酸和活性多肽等。
